Gluten Free Watchdog è molto turbato da una dichiarazione recentemente rilasciata dal Prolamin Working Group "sulla determinazione del glutine negli alimenti fermentati contenenti glutine parzialmente idrolizzato". Anche se abbiamo un grande rispetto per ciascuno degli autori, l'insinuazione che la FDA non ha portato con la scienza nel determinare che "il metodo ELISA competitivo R5 non è adatto per il rilevamento e la quantificazione del glutine in qualsiasi alimento fermentato o idrolizzato" si presenta come estremamente sprezzante del lavoro svolto dalla FDA nello scrivere questa regola. Il PWG dovrebbe avere molta familiarità con il lavoro del compianto Eric Garber, ex ricercatore della FDA. Il suo pensiero scientifico è dappertutto nella regola della FDA. Le grandi menti scientifiche possono non essere d'accordo e se l'ELISA competitivo sia adatto allo scopo è ovviamente aperto al dibattito.
La dichiarazione PWG può essere letta integralmente su: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fnut.2020.626712/full.
La spiegazione scientifica della FDA della loro visione dell'ELISA competitivo è disponibile su https://www.federalregister.gov/documents/2020/08/13/2020-17088/food-labeling-gluten-free-labeling-of-fermented- o alimenti idrolizzati (scorrere fino alla sezione 2. INNOVAZIONE NELLO SVILUPPO DI METODI PER ALIMENTI FERMENTATI, IDROLIZZATI O DISTILLATI).
Sfondo:
Parte della “Dichiarazione del Gruppo di Lavoro Prolamin sulla determinazione del glutine negli alimenti fermentati contenenti glutine parzialmente idrolizzato“ :
“Il 12 agosto 2020, la Food and Drug Administration (FDA) statunitense ha finalizzato una regola relativa all'etichettatura senza glutine per alimenti contenenti ingredienti fermentati e idrolizzati. La FDA ritiene che non esista un metodo analitico scientificamente valido efficace per determinare il glutine negli alimenti fermentati o idrolizzati. In assenza di un metodo analitico, la FDA ha deciso di valutare le indicazioni senza glutine su questi alimenti basandosi solo sull'evidenza che il cibo o l'ingrediente utilizzato è privo di glutine prima della fermentazione o dell'idrolisi. Ad esempio, le birre a base di orzo da cui viene rimosso il glutine durante la preparazione della birra mediante filtrazione speciale, adsorbimento e / o trattamento enzimatico sono quindi escluse dall'etichetta priva di glutine.
Il Prolamin Working Group (PWG) riconosce che la regola della FDA è un atto normativo e potrebbe dover prendere in considerazione diversi aspetti diversi dalle prove scientifiche, inclusa la valutazione del rischio. Tuttavia, il PWG ritiene che la scienza debba essere il motore più importante per gli atti normativi nella gestione del rischio ".
Parte dell'avviso del registro federale della FDA “Etichettatura degli alimenti; Etichettatura senza glutine di alimenti fermentati o idrolizzati " :
2. INNOVAZIONE NELLO SVILUPPO DI METODI PER ALIMENTI FERMENTATI, IDROLIZZATI O DISTILLATI
(Commento 4) Alcuni commenti affermavano che esiste un metodo valido per quantificare il glutine in un prodotto che è stato fermentato o idrolizzato, come la birra, e indicavano il test ELISA competitivo R5 con l'enzima proteasi inattivato.
(Risposta 4) Quando la conformità al § 101.91 (b) si basa su un'analisi del cibo, la FDA utilizzerà un metodo scientificamente valido in grado di rilevare in modo affidabile la presenza di 20 ppm di glutine in una varietà di matrici alimentari, comprese sia crude che cotte , o prodotti da forno (§ 101.191 (c)). Come indicato nell'avviso del 2011 e nella regola finale sull'etichettatura degli alimenti senza glutine del 2013, un metodo scientificamente valido per dimostrare la validità di un'indicazione "senza glutine" per matrici alimentari in cui metodi formalmente convalidati (ad esempio, sottoposti a una valutazione delle prestazioni multi-laboratorio ) non esiste è uno che sia accurato, preciso e specifico per lo scopo previsto e in cui i risultati della valutazione del metodo sono pubblicati nella letteratura scientifica sottoposta a revisione paritaria. In altre parole, un test scientificamente valido è quello che fa in modo coerente e affidabile ciò che è inteso fare (76 FR 46671 a 46673; 78 FR 47154 a 47165). Il test ELISA competitivo R5 ha un potenziale come metodo quantitativo e riconosciamo che, nelle condizioni di test appropriate, l'ELISA competitivo R5 può generare risultati riproducibili. L'ELISA commerciale R5 Competitive commercializzato per la rilevazione del glutine idrolizzato (o fermentato) presenta, in base alla progettazione, un vantaggio rispetto ai metodi basati su ELISA sandwich poiché non richiede la presenza di due epitopi antigenici (siti di legame dell'anticorpo) per rilevare la presenza di peptidi del glutine . Inoltre, poiché l'immunopatogenesi associata alla celiachia richiede solo un singolo elemento immunopatogeno, l'ELISA competitivo R5 è teoricamente più appropriato come saggio. Il test ELISA competitivo R5 ha un potenziale come metodo quantitativo e riconosciamo che, nelle condizioni di test appropriate, l'ELISA competitivo R5 può generare risultati riproducibili. L'ELISA commerciale R5 Competitive commercializzato per la rilevazione del glutine idrolizzato (o fermentato) presenta, in base alla progettazione, un vantaggio rispetto ai metodi basati su ELISA sandwich poiché non richiede la presenza di due epitopi antigenici (siti di legame dell'anticorpo) per rilevare la presenza di peptidi del glutine . Inoltre, poiché l'immunopatogenesi associata alla celiachia richiede solo un singolo elemento immunopatogeno, l'ELISA competitivo R5 è teoricamente più appropriato come saggio. Il test ELISA competitivo R5 ha un potenziale come metodo quantitativo e riconosciamo che, nelle condizioni di test appropriate, l'ELISA competitivo R5 può generare risultati riproducibili. L'ELISA commerciale R5 Competitive commercializzato per la rilevazione del glutine idrolizzato (o fermentato) presenta, in base alla progettazione, un vantaggio rispetto ai metodi basati su ELISA sandwich poiché non richiede la presenza di due epitopi antigenici (siti di legame dell'anticorpo) per rilevare la presenza di peptidi del glutine . Inoltre, poiché l'immunopatogenesi associata alla celiachia richiede solo un singolo elemento immunopatogeno, l'ELISA competitivo R5 è teoricamente più appropriato come saggio. l'ELISA competitivo R5 può generare risultati riproducibili. L'ELISA commerciale R5 Competitive commercializzato per la rilevazione del glutine idrolizzato (o fermentato) presenta, in base alla progettazione, un vantaggio rispetto ai metodi basati su ELISA sandwich poiché non richiede la presenza di due epitopi antigenici (siti di legame dell'anticorpo) per rilevare la presenza di peptidi del glutine . Inoltre, poiché l'immunopatogenesi associata alla celiachia richiede solo un singolo elemento immunopatogeno, l'ELISA competitivo R5 è teoricamente più appropriato come saggio. l'ELISA competitivo R5 può generare risultati riproducibili. L'ELISA commerciale R5 Competitive commercializzato per la rilevazione del glutine idrolizzato (o fermentato) presenta, in base alla progettazione, un vantaggio rispetto ai metodi basati su ELISA sandwich poiché non richiede la presenza di due epitopi antigenici (siti di legame dell'anticorpo) per rilevare la presenza di peptidi del glutine . Inoltre, poiché l'immunopatogenesi associata alla celiachia richiede solo un singolo elemento immunopatogeno, l'ELISA competitivo R5 è teoricamente più appropriato come saggio.
Tuttavia, come attualmente progettato, il metodo ELISA competitivo R5 non è adatto per la rilevazione e la quantificazione del glutine in alcun alimento fermentato o idrolizzato (ad esempio, birra, yogurt). La mancanza di adeguati standard di riferimento per la rilevazione e quantificazione del glutine sottoposto a fermentazione o proteolisi (idrolisi) rende difficile, se non impossibile, interpretare i risultati generati dall'ELISA Competitivo R5. Come attualmente fornito, lo standard di calibrazione nell'ELISA competitivo R5 può procedere per un periodo di tempo specificato a una temperatura specifica. Se le condizioni idrolitiche (tempo, temperatura o composizione in cui si verifica l'idrolisi) associate alla produzione del campione in analisi fossero diverse da quelle utilizzate per realizzare gli standard di calibrazione, è probabile che il profilo del peptide sia diverso ed è improbabile che il dosaggio generi risultati accurati. Il premio First Action dell'Associazione dei Chimici Analitici Ufficiali (AOAC OMA) assegnato all'ELISA competitivo R5 ha dichiarato che il glutine idrolizzato utilizzato come standard di calibrazione potrebbe non essere adatto e gli utenti dovrebbero stabilire i propri standard prima di fare affidamento sulla calibrazione standard (Rif.3). In particolare, piccole fluttuazioni di temperatura e tempo, così come le specifiche della proteolisi, potrebbero comportare una diversa gamma di peptidi, rendendo gli standard di calibrazione non adatti. Il premio First Action dell'Associazione dei Chimici Analitici Ufficiali (AOAC OMA) assegnato all'ELISA competitivo R5 ha dichiarato che il glutine idrolizzato utilizzato come standard di calibrazione potrebbe non essere adatto e gli utenti dovrebbero stabilire i propri standard prima di fare affidamento sulla calibrazione standard (Rif.3). In particolare, piccole fluttuazioni di temperatura e tempo, così come le specifiche della proteolisi, potrebbero comportare una diversa gamma di peptidi, rendendo gli standard di calibrazione non adatti. Il premio First Action dell'Associazione dei Chimici Analitici Ufficiali (AOAC OMA) assegnato all'ELISA competitivo R5 ha dichiarato che il glutine idrolizzato utilizzato come standard di calibrazione potrebbe non essere adatto e gli utenti dovrebbero stabilire i propri standard prima di fare affidamento sulla calibrazione standard (Rif.3). In particolare, piccole fluttuazioni di temperatura e tempo, così come le specifiche della proteolisi, potrebbero comportare una diversa gamma di peptidi, rendendo gli standard di calibrazione non adatti.
Inoltre, non è noto come interpretare l'immunopatogenicità in base alla quantità e al profilo dei peptidi del glutine rilevati. La soglia di 20 ppm di glutine era basata su studi che esaminavano l'immunopatogenicità del glutine intatto. Non è noto se l'attività biologica su base mg sia la stessa per i peptidi del glutine, misurata con proteine intatte; la risposta può dipendere dal profilo del peptide.
Pertanto, nutriamo preoccupazioni in merito all'uso dell'ELISA competitivo R5 nella rilevazione del glutine in alimenti o ingredienti fermentati o idrolizzati a causa della sfida nel dimostrare che è adatto allo scopo previsto di interpretare l'immunopatogenicità in base alla quantità e al profilo di peptidi del glutine rilevati e se il metodo funziona in modo affidabile (cioè, è un metodo scientificamente valido). Sebbene il metodo possa funzionare in modo riproducibile come indicato dalla convalida dell'American Association of Cereal Chemist International (AACCI) (Rif.4), non significa che il metodo sia adatto allo scopo previsto di rilevare e quantificare, con sufficiente precisione, il glutine contenuto proteico negli alimenti fermentati e idrolizzati, o valutare l'immunopaogenicità o quantità equivalente di proteine del glutine intatte.
Infine, la procedura di aggiunta di una quantità controllata di un idrolizzato preparato artificialmente al cibo come richiesto dal protocollo del test (un processo chiamato "spiking") può fornire una lettura imprecisa perché non riflette la capacità del dosaggio di rilevare il glutine che è stato aggiunto al cibo prima della lavorazione e idrolizzato durante la produzione. Per questo motivo, è importante che, quando possibile, i metodi vengano convalidati utilizzando glutine aggiunto al cibo prima della lavorazione. L'incapacità di rilevare il glutine utilizzando l'ELISA competitivo R5 (al di sotto del limite di rilevamento) non è un'indicazione di eliminazione completa o addirittura di riduzione del glutine. Un'altra complessità è che non sono state identificate tutte le sequenze immunopatogene del glutine. Inoltre, l'anticorpo R5 non riconosce tutte le sequenze immunopatogene (p. Es.,